Sử dụng phương pháp chiết xuất Ethanol Soxhlet để sản xuất và thử nghiệm nguyên liệu thực vật (tinh dầu) về đặc tính kháng khuẩn của chúng

Chiết xuất soxhlet trong thử nghiệm kháng khuẩn tinh dầu

Thực hiện chiết xuất ethanol theo phương pháp Soxhlet

Nguyên liệu thực vật có thể tươi (ví dụ: lá cây) hoặc khô. Nó cần được nghiền nát bằng chày và cối để có diện tích bề mặt lớn hơn. Nguyên liệu thực vật phải đủ để lấp đầy ống lót cellulose xốp trong các thí nghiệm của chúng tôi. Sử dụng trung bình 14 g cỏ xạ hương trong ống lót 25 x 80 mm.

Tất cả các thiết bị nên được cung cấp cho học sinh để lắp ráp. Việc cho phép sinh viên chế tạo thiết bị chiết xuất có thể giúp họ đánh giá cao hơn về quy trình chiết xuất. Trái ngược với việc thử nghiệm một hợp chất kháng vi sinh vật trong chai đã mua.

Quy trình chiết xuất Soxhlet

Nên bắt đầu bằng cách sử dụng giá đỡ và kẹp để hỗ trợ thiết bị chiết. Sau đó, dung môi (250ml etanol) được thêm vào bình cầu đáy tròn. Bình này được gắn vào bộ chiết và bình ngưng tụ Soxhlet trên bình đẳng áp.

Nguyên liệu thực vật đã nghiền được nạp vào ống mềm, được đặt bên trong bộ chiết Soxhlet. Tay hông trễ bằng bông thủy tinh. Dung môi được gia nhiệt bằng isomantle và sẽ bắt đầu bay hơi, di chuyển qua thiết bị đến bình ngưng. Nước ngưng tụ sau đó nhỏ giọt vào bể chứa có ống lót. Khi mức dung môi đạt đến xi phông, nó sẽ đổ trở lại bình và chu trình lại bắt đầu.

Quá trình này sẽ chạy trong tổng cộng 16 giờ. Sau khi học sinh đã thiết lập quá trình trích xuất, có thể được chạy mà không cần giám sát trực tiếp. Không nên để thiết bị hoàn toàn một mình do có sự pha trộn giữa nước chảy và thiết bị điện, vì vậy kỹ thuật viên hoặc người dùng phòng thí nghiệm khác nên được biết.

Để thực hành tốt, nên thêm một điều khiển. Đây có thể là nguyên liệu thực vật không có tác dụng kháng khuẩn đã biết. Ví dụ: dầu vận chuyển như dầu hướng dương ở giai đoạn thử nghiệm.

Sơ đồ thiết bị chiết xuất ethanol theo phương pháp Soxhlet

Sau khi quá trình kết thúc, etanol nên được làm bay hơi bằng thiết bị cô quay. Để lại một lượng nhỏ nguyên liệu thực vật được chiết xuất (khoảng 2 đến 3 ml) trong bình đáy thủy tinh.

Thử nghiệm chiết xuất cho tác dụng kháng khuẩn

Đặc tính kháng khuẩn của chiết xuất thực vật nên được thực hiện bằng kỹ thuật khuếch tán đĩa thạch sử dụng đĩa xét nghiệm kháng sinh. Học sinh nên thử nghiệm với vi sinh vật Gram dương (ví dụ: Staphylococcus aureus) và vi sinh vật Gram âm (ví dụ: Escherichia coli). Các đĩa nên được ủ ở 37°C trong 24 đến 48 giờ.

Những vấn đề an toàn 

Quá trình chiết xuất Soxhlet làm nóng dung môi (ethanol) đến nhiệt độ sôi (>78°C). Ethanol bay hơi được chứa trong thiết bị bằng bộ ngưng tụ. Tuy nhiên, thiết bị nên được đặt dưới tủ hút trong trường hợp thoát ra ngoài. Do nước chảy liên tục và nguồn nhiệt, không nên để thiết bị không được giám sát qua đêm. Nên sử dụng thiết bị bảo hộ cá nhân, bao gồm cả găng tay, khi xử lý chiết xuất thực vật, vì nó có thể gây kích ứng da.

THIẾT BỊ CHIẾT SOXHLET MODEL: CLHP SERIES

Kết luận 

Nếu một hợp chất kháng khuẩn đã được chiết xuất thành công, thì sẽ quan sát thấy một vùng trong suốt (không có sự phát triển) xung quanh chất thử nghiệm. Đây được gọi là ‘vùng ức chế’ (ZoI).

Có thể so sánh giữa các sinh vật thử nghiệm khác nhau. Chất chiết xuất từ thực vật và các biến số khác (được mô tả bên dưới).

Trong phòng thí nghiệm của chúng tôi, ZoI trung bình đối với tinh dầu chiết xuất từ cỏ xạ hương khô có đường kính 9 mm khi thử nghiệm với vi khuẩn E. coli và đường kính 16 mm khi thử nghiệm với S. aureus.

Một ví dụ về các vùng ức chế được tạo ra từ nguyên liệu thực vật cỏ xạ hương được chiết xuất sau 16 giờ chiết xuất Soxhlet bằng ethanol trên các sinh vật thử nghiệm S.Aureus (trái) và E.Coli (phải)

Tegent Việt Nam là nhà cung cấp và hỗ trợ dịch vụ kĩ thuật các sản phẩm thiết bị phòng thí nghiệm hàng đầu tại thị trường Việt Nam.

Hãy liên hệ đến chúng tôi để được hỗ trợ về thiết bị tủ sấy chân không

Xem thêm sản phẩm của CLS Scientific tại đây

Xem thêm sản phẩm của Tegent tại đây